帶你了解細胞凍存的具體步驟
作者: 來源: 日期:2019/5/16 10:19:39 人氣:3155
細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術(shù)。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,起到了細胞保種的作用。
1、配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2、取對數(shù)生長期的細胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3、去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細胞消化下來;
4、離心1000rpm,5min;

5、去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6、將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7、在細胞凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
8、凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
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